Шаблоны Joomla 3 тут
default_mobilelogo

В практике работы медицинских учреждений анализ на чувствительность к антибиотикам считается обязательным, если у врача появилось подозрение, что заболевание пациента имеет бактериальную природу. Анализ на чувствительность к антибиотикам – это лабораторный способ выявления препарата, который будет оказывать наибольшее действие на патогенную флору в данном конкретном случае болезни.

 


Как правило, в таких случаях речь идет о диско-диффузионном методе – одном из старейших в арсенале бактериологов, однако и сегодня остающемся наиболее распространенном при оценке антибиотикочувствительности. Прежде всего – потому, что он подходит для исследования большинства патогенов, в том числе и для наиболее распространенных бактерий со сложными питательными потребностями. Универсальным данный метод считается не только потому, что он оптимален для широкого круга антимикробных препаратов, но и потому, что не требует обязательного использования специального оборудования.


Определение чувствительности микроорганизмов – возбудителей инфекционных заболеваний человека к антибактериальным препаратам приобретает все более важное значение в связи с появлением и широким распространением антибактикорезистентности у бактерий. В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам показано далеко не во всех случаях.

 


Если говорить непосредственно о пациентах, то определение чувствительности нужно, чтобы избежать устойчивости бактерий к лечению. Если пациента недавно лечили антибиотиками, и теперь вновь необходим повторный курс, то требуется замена препарата. Это позволит использовать меньшие дозы лекарства и не вызывать мутации у возбудителя. В гнойных хирургических отделениях антибиотики меняют каждые два-три месяца.


Данный анализ необходим еще в том случае, если на основную группу антибиотиков у больного возникает аллергическая реакция. На языке профессионалов обязательному исследованию на чувствительность к антибактериальным препаратам подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости микроорганизма. Исследованию по оценке антибиотикочувствительности подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала с последующей идентификацией культуры.

 


Принцип диско-диффузионного метода состоит в том, что бумажные диски, пропитанные антибиотиками, в чашке Петри раскладывают поверх агара, на который нанесен исследуемый материал. После чашку закрывают и ставят в термостат. Постепенно диск погружается в желатин, а антибиотик диффундирует в окружающее пространство. Вокруг бумаги образуется зона «подавления роста». Чашки проводят в термостате двадцать четыре часа, затем их вынимают и измеряют диаметр вышеуказанной зоны.


Выбранная питательная среда готовится в соответствии с рецептурой. Перед работой необходимо проконтролировать отсутствие конденсата жидкости на внутренней поверхности крышек чашек Петри.


Для определения чувствительности диско-диффузионным методом следует использовать только стандартизированные качественные диски. Чтобы результаты исследования были достоверными, важно строго соблюдать и правила хранения и использования коммерческих дисков – в противном случае содержание в них антибиотиков может оказаться ниже допустимого уровня еще до истечения срока годности.


Небольшие партии, которые используются в повседневной работе, можно хранить в холодильнике при температуре 4-8 градусов по Цельсию, плотно укупоренными так, чтобы гарантировать невозможность попадания во флаконы влаги, кроме того, для дополнительной защиты от влаги во флаконах с дисками коммерческого изготовления содержится специальный влагопоглотитель. Флаконы с дисками следует извлекать из холодильника за 1 час до начала работы и выдерживать герметично закрытыми до достижения ими комнатной температуры.

 


Общим и принципиально важным для всех методов тестирования является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма. Бактериальную суспензию готовят либо из бульонной, либо из агаровой культуры. Для приготовления инокулюма используют чистую суточную культуру микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах. Отбирают несколько однотипных, четко изолированных колоний, выросших на неселективных плотных питательных средах. Петлей переносят незначительное количество материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным физиологическим раствором или питательным бульоном, доводя плотность инокулюма точно до 0,5 по стандарту МакФарланда. Инокулюм следует использовать в течение 15 минут после приготовления.


Наиболее удобным способом инокуляции является использование стерильных ватных тампонов. Тампон необходимо погрузить в приготовленную суспензию микроорганизма, затем избыток инокулюма удалить, отжав тампон о стенки пробирки. Инокуляцию проводят равномерно штриховыми движениями на всю поверхность агара таким образом, чтобы штрихи плотно прилегали друг к другу, поворачивая чашку Петри на 60 градусов. Приоткрытые чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 10-15 минут.

 


Не позднее чем через 15 мин после инокуляции на поверхность питательной среды наносят диски с АБП. Аппликацию дисков проводят с помощью стерильного пинцета или автоматического диспенсера. Расстояние от диска до края чашки и между дисками должно быть 15-20 мм. Таким образом, на одну чашку диаметром 100 мм следует помещать не более 6 дисков с АБП. Диски должны равномерно контактировать с поверхностью агара, для чего их следует аккуратно прижать пинцетом.


Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещают в термостат кверху дном и инкубируют при температуре 35 °С в течение 18-24 ч (в зависимости от вида тестируемого микроорганизма). Увеличение интервала времени между нанесением дисков на поверхность среды и началом инкубации (а соответственно – началом роста исследуемой культуры микроорганизма) приводит к "преддиффузии" АБП в агар и к увеличению диаметра зоны подавления роста.


После окончания инкубации чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 45° (учет в отраженном свете). Диаметр зон задержки роста измеряют с точностью до 1 мм.

 


При измерении зон задержки роста следует ориентироваться на зону полного подавления видимого роста. Не следует обращать внимания на очень мелкие колонии, выявляемые в пределах зоны задержки роста только при особых условиях освещения или увеличении, и едва заметный налет у края зоны. Исключение составляют случаи учета результатов определения чувствительности стафилококков к оксациллину, когда необходимо учитывать и самые мелкие колонии, выявляемые в пределах четкой зоны подавления роста.


Крупные колонии, выявляемые в пределах четкой зоны подавления роста, свидетельствуют о наличии посторонней микрофлоры или о гетерорезистентности популяции микроорганизмов, в этом случае необходимо повторить идентификацию микроорганизма, формирующего эту колонию, и определение чувствительности этого штамма.

 


Условно все микроорганизмы можно разделить на три группы. Деление основывается на устойчивости к антибиотику. Выделяют чувствительные возбудители, умеренно устойчивые возбудители и устойчивые возбудители. Антибиотикограмма (расшифровка латинских букв) говорит о следующем: R – возбудитель, устойчивый к препарату; I – микроорганизм проявляет умеренную устойчивость; S – бактерия, чувствительная к данному антибиотику.